Methoden zur Erythrozytenserologie

1. Prepare 2% suspensions of sample RBC in, for example, LISS or PBS.
2. Prepare 2% suspensions of control RBC in, for example, LISS or PBS.
3. Mix 50 mikroliter of RBC suspension with 50 mikroliter of primary antibody (usually undiluted).
4. Incubate at 37°C for 30 min. 
5. Wash twice by hand.
6. Add 50 mikroliter of diluted secondary antibody (e.g., FITC-labeled Fab fragment anti-human IgG (H+L) antibody 1:120).
7. Incubate at 20°C for 30 min.
8. Wash twice by hand.
9. To achieve disaggregation of potential red cell agglutinates, aspirate the suspensions twice through a 23 G needle.
10. Immediately before flow cytometric analysis, re-suspend the samples by vortexing.
11. Measure 20,000 RBC by flow cytometry.

1. 2%ige Suspension zum Beispiel in LISS (oder PBS) der zu testenden Erythrozyten herstellen.
2. 2%ige Suspension zum Beispiel in LISS (oder PBS) der Kontroll-Erythrozyten herstellen.
3. 50 Mikroliter der Erythrozytensuspension mit 50 Mikroliter des Primärantikörpers (normalerweise unverdünnt) mischen.
4. 30 min bei 37°C inkubieren.
5. Zweimal von Hand waschen.
6. 50 Mikroliter des verdünnten Sekundärantikörpers zugeben (zum Beispiel, FITC-markiertes Fab-Fragment anti-human IgG (H+L) Antikörper 1:120).
7. 30 min bei 20°C inkubieren.
8. Zweimal von Hand waschen.
9. Um die Disaggregation von möglichen Erythrozytenagglutinaten zu erreichen, die Suspension zweimal durch eine 23G Kanüle aspirieren.
10. Unmittelbar vor der Messung mit dem Durchflusszytometer die Probe durch Rüttler aufmischen.
11. 20.000 Erythrozyten mittels Durchflusszytometrie messen.