Optische Dichte

Methode

Das Verfahren verläuft nach folgenden Schritten:

  1. Schalten Sie Ihr Photometer an und stellen Sie die Messwellenlänge 600 nm ein. 
  2. Nach einer Anwärmphase kalibieren Sie das Photometer bei freiem Strahlengang auf Extinktion = 0 (entspricht einer Transmission = 100%). 
  3. Verdünnen Sie die trübe Bakteriensuspension 1:5, 1:10 und 1:30 mit Ringerlösung. Mischen Sie jeweils 0,5 ml Bakteriensuspension mit 2 ml (1:5), mit 9,5 ml (1:10) in den Reagenzgläsern sowie mit 29,5 ml (1:30) Ringerlösung (0,9 %-ige NaCl Lösung in Wasser) im Plastikbecher. Legen Sie diese Verdünnungen als Doppelbestimmung aus, um die Messgenauigkeit der Methode überprüfen zu können. Sie benötigen also 2 x 3 = 6 Reagenzgläser. 
  4. Pipettieren Sie 1 ml der gut gemischten Verdünnungen in eine saubere, reduzierte Plastikküvette. (In eine Vollküvette sollten Sie mehr als 2 ml Lösung einfüllen).
  5. Messen Sie die "Optische Dichte" der Verdünnungen bei 600 nm und notieren Sie Ihre Messwerte in der Tabelle. Beginnen Sie bei hohen Verdünnungsstufen (also bei 1:30) und messen Sie Ihre Proben in der Reihenfolge zunehmender Trübung in einer Küvette. 
  6. Zentrifugieren Sie die Küvetteninhalte in entsprechend gekennzeichneten Eppendorfgefäßen in der Tischzentrifuge ab: 5 min bei maximaler Umdrehungszahl. 
  7. Reinigen Sie die Küvette zweimal mit jeweils 1 ml Wasser. 
  8. Messen Sie die Überstände der abzentrifugierten Proben erneut in der gereinigten Plastikküvette und notieren Sie die Messwerte. Diese Werte sind die Leerwerte; sie werden in der Messwerttabelle in die Reihe der "Leerwerte" eingetragen. 
  9. Werten Sie Ihr Messprotokoll aus. Siehe dazu auch die pdf-Datei und die Beispielwerte. 
  10. Sammeln Sie alle Abfälle, autoklavieren Sie diese in offenen Gefäßen und entsorgen Sie anschließend die Lösungen im Abwasser.