Enzym-Induktion

Ergebnisse

Die drei Kulturen wurden jeweils mit 0,5 ml einer Übernachtkultur angeimpft. Das Wachstum der Kulturen wurde über insgesamt 120 min verfolgt. Nach 15 min wurde in den Kolben (1) Lactose, in den Kolben (2) Lactose und Glucose sowie in den Kolben (3) Lactose und Chloramphenicol zugegeben. Das Wachstum wurde in allen drei Kulturen über die Optische Dichte ermittelt. Ihre Werte könnten wie folgt ausseh

Tabelle 1: O.D.-Werte der E. coli Kulturen

Zeit (min)Kultur 1Kultur 2Kultur 3
00,970,80,65
151,491,331,24
1207,77,81,3



Abbildung 1: Wachstum von E. coli in drei Kulturansätzen zur Induktion der beta-Galaktosidase.



Beachten Sie, dass E. coli in Gegenwart von Lactose und in Gegenwart von Lactose+Glucose ähnlich gut gewachsen ist. Chloramphenicol hemmt das Wachstum.

Die Messung der beta-Galaktosidase-Aktivität in diesen Kulturen wird über die Freisetzung des gelben o-Nitrophenols aus ortho-Nitrophenylglycosid (o-NPG) nachgewiesen. In der folgenden Abbildung wird die beta-Galaktosidase-Aktivität gemessen als delta-E420-Werte in den drei Kulturansätzen gezeigt.

 

Tabelle 2: Extinktionswerte im o-NPG-Test

Zeit (min)Ansatz 1Ansatz 2Ansatz 3
00,021 0,0170,017
100,0190,017 0,018
150,0280,0270,025
Zugaben
250,0900,0290,024
350,3170,0330,023
600,9250,0530,023
120 2,260,1640,040
120*0,0690,0250,011
120*: nach dem Aufschluss abzentrifugierte Zellen


 

Abbildung 2: Enzymaktivität der beta-Galaktosidase in den drei Kulturansätzen, gemessen als Freisetzung des gelben o-Nitrophenols bei 420 nm.


Beachten Sie, dass die beta-Galaktosidase-Aktivität im Ansatz mit Lactose über den Zeitverlauf sehr steil ansteigt. Im Ansatz mit Lactose+Glucose fällt dieser Anstieg deutlich geringer aus. Ebenso im Ansatz, der neben Lactose Chloramphenicol enthielt.